Autofagoszóma biogenezis anti aging.

SZTA Évkönyv 2017/18

Energia anyagcsere Absztrakt A különböző sejttípusokban a károsodott mitokondriális karbantartás számos humán patológia és öregedés közös jellemzője 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8.

A mitokondriális biogenezis koordinátái a károsodott vagy felesleges mitokondriumok eltávolításával a sejtek homeosztázisának fenntartása érdekében nem ismertek. Itt azt mutatjuk be, hogy a mitofágia, egy szelektív típusú autofágia, amely a mitokondriumokat célozza meg a lebomláshoz, a mitokondriális biogenezissel kapcsolódik a mitokondriális tartalom és a Caenorhabditis elegans-ban való tartósság szabályozásához.

  1. Természetes anti aging termékek érzékeny bőrre
  2. Post-translációs módosítások Absztrakt A makroautofágia autofágia kulcsfontosságú celluláris stresszválasz a hibás makromolekulák és organellák lebontásához, valamint bioenergetikus intermedierek biztosítása a hypoxia és a tápanyaghiány miatt.
  3. Thierry racine suisse anti aging

Megállapítottuk, hogy a DCT-1 a mitophágia és a hosszú élettartam biztosításának kulcsfontosságú közvetítője a C. A mitofágia károsodása veszélyezteti a stresszállóságot és a mitokondriális retrográd jelátvitelt váltja ki az SKN-1 transzkripciós faktoron keresztül, amely mind a mitokondriális biogenezis géneket, mind a mitofágiát szabályozza a DCT-1 expressziójának fokozásával.

Eredményeink egy homeosztatikus visszacsatoló hurkot mutatnak be, amely integrálja az anyagcsere jeleket a mitokondriumok biogenezisének és forgalmának koordinálására. E két folyamat szétválasztása az öregedés során hozzájárul a sérült mitokondriumok túlterheléséhez és a sejtfunkció csökkenéséhez.

Az Atg3 és az Atg7 oxidációja az autofágia gátlását közvetíti

Autofagoszóma biogenezis anti aging Számos kóros állapot és öregedés közös nevezője a sejtek mitokondriális tartalmának 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8-as deregulációja. A mitokondriális tömeges homeosztázis sejt- és molekuláris alapjainak feltárására a mitokondrium szelektív autofágia mitofágia bevonását vizsgáltuk a C.

A mitokondriumok fokozatosan növekszenek az életkorral a vad típusú fonálféregekben 1 1a. Ábra és táskás szem alkohol kibővített adatok 1a. Így az autofágia meghibásodása rontja a mitokondriumok eltávolítását, és hozzájárulhat a mitokondriumok progresszív felhalmozódásához az öregedés során. A bélben a mitokondriumra irányított GFP-t expresszáló transzgenikus állatokat monitoroztuk a a felnőttkorban a mitokondriális tartalom tekintetében.

Méretarány, μm. Skála, 20 μm. Elülső, balra; hátsó, jobb. Mérlegrúd, 20 μm. A képeket × 5 és × 40 objektív objektívekkel szereltük fel. A DCTet a fejlődés során széles körben fejezik ki, mint egy integrált membránfehérjét, és a külső mitokondriális membránra kiterjesztett adatok, 2b — g lokalizálva.

A BEChez hasonlóan a DCT-1 hiány növeli a bél- és izomsejtek mitokondriális tartalmát a fiatal felnőtt állatokban, és torzítja a mitokondriális hálózat morfológiáját 1c. Ábra, d és kiterjesztett adatok az 1g — k és 3a — c ábrák. És a 4a. Annak igazolására, hogy a mitofágia károsodása a férgek mitokondriális felhalmozódásán alapul, két összetett rendszert fejlesztettünk ki a mitophágia in vivo megfigyelésére. Először olyan transzgénikus állatokat állítottunk elő, amelyek mitokondriumra irányított Rosella mtRosella bioszenzort expresszálnak, amely egy gyorsan érő pH-érzéketlen DsRed-t egyesít, amely egy pH-érzékeny zöld fluoreszcens fehérje GFP változattal van összekapcsolva.

Ennek az eszköznek a validálásához normál és mitofágia-indukáló körülmények között vizsgáltuk az mtRosella-t hordozó állatokat hőstressz, karbonil-cianid m- klór-fenil-hidrazon CCCP és paraquat-expozíció. A lgg-1 gén, az általános autofág gép alapvető összetevőjének letiltása blokkolja a mitofágiát Extended Data 4f — h ábra.

Emellett olyan transzgénikus állatokat állítottunk autofagoszóma biogenezis anti aging, amelyek mitokondriával célzott GFP-t expresszálnak, az LGG-1 autofagoszómás markerrel együtt, a testfal izomsejtjeiben DsRed-el fuzionált, és normál és mitofágia-indukáló körülmények között ko-lokalizációt kerestek. A mitofágia-indukáló ingerek az autofagoszómák kialakulását indukálják, amelyek széles körben lokalizálódnak a mitokondriumokkal 5a. A hosszútávú daf-2 mutánsoknál a mitofágia kifejezett indukciója is megfigyelhető volt 1.

Minden esetben a mitofágia indukciója teljesen függ a DCTtől 1e. Ábra és a kiterjesztett adatok a 4.

A mitofágia és a mitokondriális biogenezis összehangolása a C. elegansban az öregedés során

Ezenkívül teszteltük a autofagoszóma biogenezis anti aging foszfatáz és autofagoszóma biogenezis anti aging tenzin PTEN által indukált kináz 1 PINK-1 és a citinikus E3 ubiquitin ligáz Parkin két kritikus konzervált komponensének követelményét A mitofágia-kimerült állatokban a megnövekedett mitokondriális tömeg nem kompenzáló védelmi mechanizmus a kiterjedt diszfunkcionális mitokondriumok ellen, vagy a megnövekedett mitokondriális biogenezis, a proteazomális aktivitás vagy a riporterek módosított szövetspecifikus promoter aktivitása miatt Extended Data Fig.

Továbbá a mitokondriális dinamikában bekövetkező mitokondriális morfológiai hibák episztatikusak a mitofágia gátlásakor fellépő morfológiai aberrációkra, ami utal arra, hogy ezek másodlagos események kiterjesztett adatok 3a — c ábra. Érdekes, hogy az oxidatív és mitokondriális stressz esetén a CED-9 szükséges a mitofágiára bővített adatok, 7c. Ábra, d. Nevezetesen, a DCT-1, a PINK-1 és a PDR-1 autofagoszóma biogenezis anti aging nem redundánsan működik, hogy megszüntesse a megnövekedett autofágiát a hosszú életű daf-2 mutánsokban, és jelentősen lerövidíti azok élettartamát, míg nem változtatja meg a vad típusú állatok alapvető autofágiáját vagy élettartamát 2a — c ábra, bővített adatok a 4c — e és 8a — f ábrák és az 1.

Továbbá a dct-1 vagy a pink-1 knockdown csökkenti a mutánsok élettartamának meghosszabbítását moderált mitokondriális diszfunkcióval isp-1 autofagoszóma biogenezis anti aging clk-1vagy az eredetileg kalória-korlátozott evés-2 mutánsokkal 2d. Ábra, kiterjesztett adatok, 8g. Azt a következtetést vontuk le, hogy a mitofágia egy olyan hosszú élettartam-biztosítási folyamat, amely a különböző élettartamot meghosszabbító manipulációk pro-túlélési hatásainak alapját képezi.

Hiba rúd, sem b, dct-1, rózsaszín-1, pdr-1 vagy lgg-1 lekapcsolása, összehasonlítva a lgg-1 és dct-1 vagy lgg-1 és rózsaszín-1 vagy lgg- 1 vagy lg- Az 1. Az élettartam értékeket az 1. A dct-1, rózsaszín-1 és pdr-1 mutánsok lényegesen érzékenyebbek a különböző stresszorokra 3a — e és a kiterjesztett adatok a 9a. Feltételeztük, hogy a csökkent stresszállóság a diszfunkcionális mitokondriumok felhalmozódásából eredhet a mitofágia mutánsokba.

Valóban, a mitofágia-hiányos állatokban, bár a mitokondriális DNS mtDNS szintek viszonylag változatlanok bővített adatok, 9f. Ezek az eredmények a fentiekben említett torzított mitokondriális hálózati morfológiával kombinálva azt mutatják, hogy a mitofágia károsodása kifejezett mitokondriális diszfunkciót vált ki.

Azt tapasztaltuk, hogy a DCT-1 a lizin on ubiquitinált, ami a mitofágia-indukáló körülmények között gazdagodik, és a PINKtől bővített adatok, 9l — o. Ábra függ. A fent említett hibák ellenére a mitofágia kimerült állatok stressz-ingerek hiányában normális élettartamot mutatnak 2b — d ábra és bővített adatok a 8a — h ábra. Ennek a látszólagos paradoxonnak a megoldására azt vizsgáltuk, hogy a diszfunkcionális mitokondriumok felhalmozódása mitofágiás károsodás esetén kompenzáló retrográd választ jelez, amely a mitokondriális fehérjéket autofagoszóma biogenezis anti aging nukleáris gének expresszióját indukálja.

A sérült mitokondriumok felhalmozódása oxidatív stresszt okoz. Az SKN-1 transzkripciós aktivitás központi szerepet játszik a mitohormesis által közvetített 22, 23 hosszú élettartamban, és szerepet játszik a 24, 25, 26 mitokondriális homeosztázis fenntartásában. Érdekes módon az SKN-1 specifikusan aktiválódik a mitofágia gátlásakor 4a. Ábra és a kiterjesztett adatok a 10a — d ábra. Az SKN-1 több mitokondriális biogenezis gén, valamint a mitophágia dct -1 gén expressziójához szükséges 4b.

Ábra és kiterjesztett adatok, 10e. Ábra, h. Ezek az eredmények arra utalnak, hogy az SKN-1 a dct -1 transzkripció szabályozásával szabályozhatja a mitofágiát. Ábra és kiterjesztett adatok 10i. Ábra, j, l.

A DAF aktivitása is szükséges a mitofágia stimulációhoz. A dct-1 vagy a pink-1 letörése a vad típusú állatokkal ellentétben lerövidíti a skn-1 mutáns élettartamát bővített adatok: 10k. Ábra és 1.

autofagoszóma biogenezis anti aging

A mitophagyhiányos állatoknak az N- acetil-l-cisztein Autofagoszóma biogenezis anti aging és a 27, 28 butilezett hidroxi-anizol BHA ROS-szennyezővel történő kezelése nem változtatja meg életüket, kizárva a mitohormetikus visszacsatolás jelzésének bevonását bővített adatok, 8i. Meglepő módon az etilénglikol-tetraecetsav EGTAegy kalcium-specifikus kelátképző szer kiegészítése lerövidíti a mitophagyhiányos férgek élettartamát a vad típusú állatok élettartamának befolyásolása nélkül Extended Data Fig.

Megfigyeléseink arra utalnak, hogy a mitofágiás károsodás következtében kialakuló citoplazmatikus kalciumszint a SKN-1 aktiválódását közvetíti, ami leküzdi a bazális mitofágia csökkenését a hosszú élettartamban.

autofagoszóma biogenezis anti aging

Mérlegrudak, μm. Normál körülmények között a bazális szintű mitofágia fenntartja a mitokondriális medencét és szabályozza a mitokondriális számot a sejt anyagcsere-állapotától függően.

  • Neogenezis központja az anti aging
  • Jó öregedésgátló termékek
  • Szarka Patobiokemia | PDF
  • SZTA Évkönyv /18

A mitofágiát stressz körülmények között indukálja a autofagoszóma biogenezis anti aging mitokondriumok kiküszöbölésére és a sejtek túlélésének elősegítésére. Az SKN-1 egyidejű aktiválása fokozza a mitofágiát és elősegíti a mitokondriális biogenezist a DCT-1 és több mitokondriális gén expressziójának stimulálásával. Hibás sávok, sem A képeket az 5 és × 40 objektív objektívek használatával szereztük be.

Teljes méretű kép Töltse le a PowerPoint diát Összességében elemzésünk olyan kulcsfontosságú szabályozási mechanizmust fedez fel, amely a mitokondriális biogenesiset a mitokondriális clearance-el szelektív autofágián keresztül összekapcsolja, hogy megőrizze a C.

A sérült vagy felesleges mitokondriumok felhalmozódása oxidatív stresszt okoz, amely kétoldalú retrográd választ indít, amelyet az SKN-1 közvetít, és mind a mitokondriális biogenezis, mind a mitofág gének összehangolt indukcióját jelenti. Ez a zárt visszacsatolási hurok megőrzi a mitokondriális minőséget a sérült és friss mitokondriumok semlegesítésével 4h.

Emellett a mitokondriumok biogenezisének és forgalmának összehangolása lehetővé teszi, hogy a sejtek mitokondriális tartalmukat a fiziológiai igényekre, visine szemcsepp árak stresszre és más intracelluláris vagy környezeti ingerekre reagálva módosítsák.

Ebben az összefüggésben a mitofágia korfüggő csökkenése akadályozza a sérült mitokondriumok eltávolítását, és rontja a mitokondriális biogenezist a progresszív mitokondriális felhalmozódás előidézésére.

A szorosan összehangolt reakcióban szerepet autofagoszóma biogenezis anti aging szabályozó tényezők szoros evolúciós megőrzése és mindenütt jelenlévő expressziója azt sugallja, hogy a hasonló útvonalak különböző taxonokon tarthatják fenn a mitokondriális homeosztázist. Mód Statisztikai módszereket nem használtunk a minta méretének meghatározására.

SZTA Évkönyv 2017/18

Törzsek és genetika A C. A nematóda-tenyésztési hőmérsékletet 20 ° C-on tartjuk, hacsak másként nem jelezzük. Molekuláris klónozás A p dct-1 DCT-1 :: GFP riporter konstrukció létrehozásához egy KpnI fragmentumot fuzionáltunk, amely a dct-1 és 2 kb kódoló szekvenciát tartalmazza a kódoló szekvencia előtt, a C. A transzlációs p dct-1 DCT-1 :: GFP fúziós konstrukciót pRF4-vel együtt injektáltuk a rol-6 anti aging pszichológiai elméletek domináns transzformációs markert tartalmazza a vad típusú állatok gonádjaiba.

A p let GCaMP2. A kapott plazmid konstrukciót pRF4-vel együtt injektáltuk a vad típusú állatok gonádjába. Ezután behelyeztünk egy tamp gén két első exont tartalmazó BamHI fragmenst a myo-3 promótertől és a Rosella kódoló szekvenciától felfelé.

Szarka Patobiokemia

A tomm fragmenst C. A transzlációs p unc CTS-1 :: mCherry fúziós konstrukciót pRF4-vel együtt injektáltuk a vad típusú állatok gonádjaiba. A p let DCT-1 mentési plazmid előállításához a pcD A dct-1 fragmentumot C. Ezután eltávolítottuk a myo-3 promótert a pPD A transzlációs p let DCT-1 fúziós konstrukciót pRF4-vel együtt injektáltuk a dct -1 tm állatok gonádjaiba.

A mio-3 promótert a pPD A dct-1 ABH3 fragmenst C. A skn-1, dct-1, pdr-1, ced-9, pbs-5, rpn-6, fzo-1, drp-1, isp-1, clk-1 és unc RNSi konstrukciók tervezéséhez gén -specifikus fragmenseket kaptunk közvetlenül a C. A PCR által generált fragmenseket a pL plazmidvektorba szubklónoztuk. A kontroll kísérletekben üres vektorot hordozó baktériumokat használtunk. Skn-1, pbs-5 és rpn-6 RNSi esetén a hatás súlyos lehet, ami az állatok embrionális letalitásához vezet.

Az RNSi-vel kezelt állatokat dct-1 és rózsaszín-1 ellen figyeltük meg a felnőttkor 4. Hőfeszültség vizsgálathoz az L4 lárvákat RNSi lemezeken tenyésztettük. A felnőttkor 4. A képeket ugyanazon expozíció alapján szereztük be.

autofagoszóma biogenezis anti aging

Az átlagos pixelintenzitás értékeket különböző állatok mintavételezésével számítottuk ki. Az átlagértékeket összehasonlítatlan t- tesztekkel hasonlítottuk össze.

Többszörös összehasonlításhoz az egy faktor ANOVA varianciaanalízist alkalmaztuk, amelyet a post hoc Bonferroni teszttel korrigáltunk.

Mindegyik vizsgálatot legalább háromszor megismételjük.

autofagoszóma biogenezis anti aging

Statisztikai elemzésekhez a Prism szoftvercsomagot GraphPad Software használtuk. Az állatokat 2 napig inkubáltuk a vegyülettel. Az állatokat 2 napon át inkubáltuk a megfelelő vegyülettel.

A TMRE festéshez tetrametil-rodamin, etil-észter, perklorát, egy érintetlen, lélegző mitokondriumban felhalmozódó festék 1 napos felnőtteket 20 ° C-on vagy 25 ° C-on nM TMRE jelenlétében 24 órán át tenyésztettünk.

Images were acquired under the same exposure. Average pixel intensity values were calculated by sampling images of different animals. Each assay was repeated at least three times. We used the Prism software package GraphPad Software for statistical analyses.

Stress assays To evaluate thermotolerance heat stress assay4-day-old adult hermaphrodites were placed on pre-warmed 37 °C NGM plates and incubated at 37 °C. After incubation for 7 h, plates were removed; worms were recovered at 20 °C for 1 h. Then, worms were scored for motility, provoked movement and pharyngeal pumping.

A p62 szintjének vizsgálatával meghatározható a Drosophila sejtek alapszintű autofág aktivitása

Worms failing to display any of these traits were scored as dead. Three distinct populations of adults for each strain were scored autofagoszóma biogenezis anti aging over the assay period. Animals were scored for survival after a 1-h recovery period at 20 °C. Three days after exposure, animals were scored for survival. For oxidative stress assays, 7-day-old adult hermaphrodites were exposed to paraquat at a final concentration of 8 mM.

Animals were scored for survival after 2 days at 20 °C. For the starvation assay, worm eggs were collected upon hypochlorite treatment of gravid adults, resuspended in M9 buffer and incubated at 20 °C. Newly hatched worms were arrested in L1 larval stage owing to lack of food.

autofagoszóma biogenezis anti aging

Survival under starvation was assessed every 2 days autofagoszóma biogenezis anti aging taking aliquots and scoring live animals. Three distinct autofagoszóma biogenezis anti aging for each strain were scored repeatedly over the assay period.

Fontos információk